IGEM竞赛团队采访基因工程疫苗专家

7月25日下午，我们有幸前往厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心拜访L教授。

L教授是基因工程疫苗方面的专家，同时，他的研究领域还包括重要传染病病毒免疫表位的结构和功能研究、基于结构的分子模拟和分子设计。7月25日下午，我们有幸前往厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心拜访L教授，向他请教我们在设计大肠杆菌表面展示系统以及CRISPR/Cas9系统中遇到的问题。

首先，我们向L教授简要介绍了我们的课题，并提出了目前存在的问题。我们在背景调研时发现，当二者的距离足够近时，外膜囊泡（Outer Membrane vesicles, OMVs）有概率与细菌发生膜融合，从而将装载的质粒递送到细菌中。因此在课题设计中，我们希望通过在OMVs表面展示能与细菌受体结合的配体，拉进OMVs与细菌的距离，提升质粒递送的效率。李教授认为，受体和配体的特异性结合在原理上确实能够使OMVs与细菌间的距离减少，利用这种方法来提升递送效率不失为一个好的选择，但与此同时，我们还应该关注这种递送方式本身的效率量级是否符合我们的期望。

随后，我们向李教授请教如何优化表面展示系统，提高表面展示蛋白的效率。针对此问题，李教授认为我们应该关注两个方面。一是蛋白被展示在表面的效率，生物体内存在复杂的蛋白表达调控机制，有时即使蛋白表达量很高，由于生物自身的调控和限制，真正能展示在表面的也只有一小部分。二是蛋白被展示在表面的方式，将细菌内源的表面展示蛋白作为载体是实现外源蛋白表面展示的主要途径之一。而为了进一步提高其展示效率，可以使用柔性的Linker将载体和被展示的蛋白连接起来，同时，在选择载体时，也需要注意载体的载量。对于表面展示部分启动子的选择，李教授推荐我们在治疗时使用诱导型启动子，在需要治疗时再进行诱导，而在预防时则使用组成型启动子，提供长期有效的保护。

CRISPR/Cas9系统方面，李教授认为我们课题中涉及的I型系统的设计在理论层面上没有问题，但仍需着重关注其是否出现脱靶效应。

最后，李教授还提出几个问题。我们目前的预防方法虽然是从外部拮抗致病菌，但或许还可以考虑从对虾自身的免疫系统出发，建立相应的防御机制。同时，我们还应该考虑到工程菌在对虾的肠道中正常发挥作用的可行性。

经过这次与L教授的交流，我们对表面展示和CRISPR/Cas9系统有了更明晰的理解。在李教授深入浅出的答疑解惑中，我们受益匪浅，不仅收获了一段与业内大佬交流的宝贵经历，也对课题有了更深层次的思考。