IGEM竞赛团队采访水生动物病害防控技术专家

2022年8月25日，为了更深入了解课题中对对虾急性肝胰腺坏死综合症(AHPND)的病原菌检测、治疗与预防方案在实际应用中的可行性，我们联系了福建省渔业局水产技术推广总站，对实验室副主任L老师进行了线上采访。

L老师是福建省水产技术推广总站实验室副主任、全国技术能手、福建省五一劳动奖章获得者，任中国水产学会青年工作委员会、福建水产学会病害专业委员会、海水养殖专业委员会委员，主要从事水生动物病害防控工作，在核心期刊发表论文十余篇。

本次采访中，我们首先向L老师简要介绍了课题的设计方案，L老师表示，如何有效防治由副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)引起的AHPND仍是一个急需解决的问题，有很多科研工作者也正投身于此。但是，相关研究多集中于预防和检测方面，且实际生产实践中还是“防大于治”。

我们了解到，目前针对AHPND的预防主要分为以下几个方面。首先是对早期虾苗的检测，确保虾苗在投放时未携带病原；其次是“养虾先养水”，主要通过向虾塘投放益生菌来结合病原菌，减少对虾病害的发生；同时也应注重池塘结构和水流控制的优化，实现集污排放，并定期对虾塘进行有效的清淤、消毒和翻晒工作。

其中，投放益生菌这一方法引起了我们的关注。在我们的设计中，涉及到向虾塘中投放携带有工程质粒或效应物质的细菌外膜囊泡(OMVs)，因此，我们向L老师请教了有关该设计的可行性问题。他表示，益生菌的投放几乎覆盖了对虾养殖的全过程，甚至在投放虾苗前，养殖户就会在开始向虾塘中投放益生菌。又因为对虾养殖中排水量很大，到养殖后期，一天内虾塘中更新水量甚至会达到70%，所以在实际应用中，就需要确保投放物质的量始终保持有效水平，而这对我们课题来说，也是一个值得考虑的关键点。

病原菌检测方面，L老师谈到，近年来水产养殖业中水质检测方法发展迅速，大多数对虾养殖场都能自行检测养殖水水质，有些甚至拥有小型实验室可以做到微生物检测；而那些规模较小的私人养殖场，则可以联系专业机构进行检测。

同时我们也了解到，对虾肝胰腺的颜色可作为初步判断对虾是否具有患病风险的标准，而实验室常用TCBS(Thiosulfate-citrate-bile salt-sucrose agar，硫柠胆蔗琼脂培养基)平板培养观察绿色菌落的方法来粗略衡量不能利用蔗糖的弧菌数量，一定程度上能够反映对虾患有AHPND的风险。

然而，TCBS法的检测准确性较低，不携带毒力质粒pVA1的副溶血性弧菌或不能利用蔗糖的非副溶血性弧菌虽不会导致AHPND，但却能在培养基上形成绿色菌落；而携带pVA1且能利用蔗糖的弧菌，例如欧文斯氏弧菌(Vibrio owensii)，能够引起AHPND却在TCBS上表现为黄色菌落。

副溶血性弧菌能够导致对虾患上AHPND的关键在于其毒力质粒上携带的毒素基因pirA和pirB，因此，要实现对该疾病快速准确的诊断，应利用核酸扩增、核酸杂交等分子生物学方法，精确靶向毒素基因，或利用免疫学方法对毒力蛋白PirAB进行检测。

而对于我们提出的利用无细胞传感器和核酶剪切原理对毒力蛋白PirAB进行检测以实现副溶血性弧菌检测这一设计，L老师表示认可，同时也提醒我们除了检测成本，也应关注检测过程中操作的简易性。

在本次调研过程，以及与L老师的交流探讨中，我们了解了很多有关对虾养殖的背景知识，也收获了有关课题实际可行性与应用性方面的指导与建议。

在了解对虾养殖大背景的前提下，把握检测的精确度与周期，明确治疗与预防的关键环节，能够让我们将课题与实际相结合，更好地服务于当前的对虾养殖行业。