IGEM竞赛团队采访化学化工学院副教授

2022年4月23日早9:00，我们前往厦门大学化学化工学院采访了W老师。

W老师是厦门大学化学化工学院的副教授，她的主要研究方向是单细胞分析及其在生命科学、生物医药、食品安全、环境监测领域中的应用，致病菌的快速、灵敏、特异性检测技术及化学生物学与功能蛋白质组学研究，同时，我们了解到，其课题组内目前正进行细胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）的相关研究。本次我们向她简要介绍了项目的设计方案，并寻求她的建议与意见。由于我们在课题中使用的原核生物外膜囊泡（outer membrane vesicles，OMVs）与EVs有一定的相似性，我们也向她咨询了OMVs的相关问题。

W老师首先肯定了我们使用OMVs作为载体的这一想法，在水产养殖的复杂环境中，使用这一载体可以有效包裹并递送我们的目的货物，避免在使用过程中对其功能造成损害。同时，我们也对课题中大量产生OMVs这一设计的必要性展开讨论，W老师向我们介绍，虽然我们使用了两种方法使大肠杆菌产生更多的OMVs，但本质上都是通过破坏膜结构来达到目的，可能会对大肠杆菌的生存造成一定影响。在实际使用中，由于大肠杆菌本身就能产生大量的OMVs，这一设计的具体应用范围需要进一步的考虑，如在预防阶段暂不使用这一设计，而是在治疗阶段应用以达到快速治愈的目的。

在OMVs大量分泌的验证性实验设计方面，我们的方案一选择同时抑制两种外膜蛋白的表达，即外膜A蛋白（outer membrane protein A，OmpA）和脂蛋白（lipoprotein，LPP）。W老师表示，由于OmpA 与LPP 之间的联系未知，同时抑制两者的表达可能会对大肠杆菌造成较大影响。为提高整体实验设计的合理性，W老师建议我们分成三组实验进行验证，即比较单独沉默OmpA基因、单独沉默LPP基因以及同时沉默两者时OMVs的产量。

在OMVs提取实验设计方面，W老师告诉我们，目前使用超离是最快最方便的方法，但需要仪器的支持；而对于镍柱纯化的方法，由于OMVs的大小并不是固定的，纯化前可以通过预实验来确定所需的滤膜孔径大小。她建议我们根据实验所需样品的纯度选择合适的方法，无需拘泥于用同一种。最后，对于使用表面展示蛋白是否会对大肠杆菌造成影响这一问题，W老师表示虽然可能会提高其对外界的敏感度，但无需过度担心。

在对W老师的采访中，我们收获了很多有关OMVs的知识，在课题设计和实验设计方面也得到很大帮助。